Métodos rápidos alternativos a la ISO 6579 para el análisis de Salmonella

Alfredo Corujo FernándezProject Manager Food SafetyNutreco España

TEMAS• Métodos rápidos: Consideraciones generales

• Sistemas basados en pruebas ELISA:

ELFA

VIAS

DIFUSIÓN

• Sistemas basados en, pH (movilidad)

• Sistemas basados en separación Inmunomagnética

• Sistemas basados en Bacteriófagos

• Sistemas basados en Hibridación

• Sistemas basados en PCR

• Sistema serotipado basado en microarrays

• Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR

• Tendencias futuras en la detección de patógenos: Biosensores

Métodos Rápidos: Consideraciones generales“Se puede decir que método rápido es aquel que esmás rápido, sencillo o confiable que lo convencional”.

Clasificación en áreas de acuerdo a lo que se busca:Sistemas para facilitar la toma de muestras

Métodos para ayudar al procesamiento de las muestras

Sistemas de cuantificación microbiológica

Métodos para identificación y cuantificación de microorganismos

Sistemas especiales para análisis de muestras de aguas, ambientales ysuperficies

Sistemas de identificación mediante métodos moleculares

Métodos inmunológicos para detección y/o cuantificación de microorganismos

Otros métodos misceláneos

Métodos Rápidos: Consideraciones generalesCARACTERISTICAS DE UN MÉTODO RÁPIDO IDEAL

Preciso

Rápido y productivo

Económico

Aceptable

Realización simple

Entrenamiento

Reactivos comunes

Reputación de la compañía

Buen servicio técnico

Requerimientos de espacio y utilidad óptimos

Agriculture R&D

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA

Agriculture R&D

Valores para el control negativo: OD 0.030 Valores para el control positivo: OD 0.900-1.700. Se considera la muestra POSITIVA: OD 0,200.

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

Agriculture R&D

ASSURANCE GOLD SALMONELLA EIA

Resultados el día siguiente

Para alimentos procesados. Alimentos crudos& altamente contaminados necesitanincubación adicional de un día al otro.

Dos opciones para lectura de losresultados del test:

Los resultados pueden ser leídos visualmenteo por instrumentos con lectora de microplaca.

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)

REVEAL (Neogen)

Reveal Reveal SE

Reveal 2.0

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)

Singlepath (Merck)

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras ambientales

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)VIP (Biocontrol)

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (ELFA)

Sistema VIDAS (Biomerieux)

Salmonella

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras ambientales (Calzas, Heces....)

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS VIA

- +

Sistema TECRA (Biotrace)

Salmonella

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras ambientales L+D

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

SISTEMAS BASADOS EN INMUNOCONCENTRACIÓN + ELISA (ELFA)

Sistema VIDAS (Biomerieux)

Salmonella

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (difusión)

1-2 TEST (Biocontrol)

Salmonellas móviles

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras ambientales

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN, pH (MOVILIDAD)

OSRT (OXOID)

Salmonellas móviles

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras ambientales

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

Cada test contiene 2 tubos :Tubo A (Azul) contiene Rappaport- Vassiliadis modificado como medio selectivo, y Lysine Iron Cystine Rojo neutro como medio indicador.Tubo B (Rojo) contiene Lysine Deoxycholate modificado medio selectivo y Brilliant Green modificado como medio indicador.

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA

Sistema DYNAL BIOTECH (Dynabeads)

Salmonella spp+

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras ambientales L+D

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras ambientales L+D

Sistema Pathatrix

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

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Métodos alternativos para la detección de SalmonellaSISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras L+D

VIDAS UP SALMONELLA

CONFIRMACIÓN

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Métodos alternativos para la detección de SalmonellaSISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS

RapidCheck Select S.enteritidis (SDIX)

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras ambientales

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Métodos alternativos para la detección de SalmonellaSISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS

RapidCheck confirmación S.enteritidis (SDIX)

Confirmación de cepas

S. enteritidis

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SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIÓNMétodos alternativos para la detección de Salmonella

HybriScan Salmonella (Sigma- Aldrich)

Muestras con OD% < 10 son consideradas negativas.

Muestras con OD% > 10 < 20 son consideradas dudosas.

Muestras con OD% ≥ 20 son consideradas positive.

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIÓNMétodos alternativos para la detección de Salmonella

Lumiprobe 24 (EUROPROBE)

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SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIÓNMétodos alternativos para la detección de Salmonella

GeneQuence (NEOGEN)

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SISTEMAS BASADOS EN PCRMétodos alternativos para la detección de Salmonella

Agriculture R&D

SISTEMAS BASADOS EN Real Time PCR (BAX System)

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

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SISTEMAS BASADOS EN RT- PCR

iQ-CHECK

(BIORAD)

LIGTHCYCLER

(ROCHE)

MX3005P

(STRATAGENE)

ABI PRISM 7900HT

(APPLIED BIOSYSTEMS)

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

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SISTEMAS BASADOS EN PCR (Assurance GDS)

Sistema Multiplex (Biocontrol):

Matrices:

•Ingredientes

•Alimentos

•Muestras ambientales

Combina concentración de muestra y detección de DNA

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

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SISTEMAS BASADOS EN PCR (Led Active Blue)

Sistema Fotoactivación ( ib-Applied science):

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

EMA:Ethidium bromide monoazide

PMA: propidium monoazide

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SISTEMAS SEROTIPADO BASADO EN MICROARRAYS

PREMITEST SALMONELLA

CHECK- POINTS

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

AT READER

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Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR

Muestra positiva

REP-PCR

Identificación cepas de Salmonella.

Indentificación de fuentes de contaminación ambiental

Métodos alternativos para la detección de Salmonella

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Tendencias futuras en la detección de patógenos

SISTEMAS BASADOS EN BIOSENSORES

•Staphylococcus aureus •Salmonella spp. •E. coli•Yersinia enterocolitica, •Bacillus cereus• Clostridium perfringens •Listeria monocytogenes•Shigella spp. •Vibrio spp. •Campylobacter

Oligonucleotidos específicos de virulenciaE.coli O157:H7 (hly A, eae A)

Salmonella spp (inv A, agf B)

CONCLUSIONES

• Existen diferentes métodos alternativos más rápidos que la ISO.

• La elección del método dependerá de la matriz a analizar.

• El método seleccionado debería estar validado para la matriz

problema.

• Para matrices muy contaminadas se recomiendan protocolos de 48horas.

• Existen pocos métodos alternativos para matrices procedentes de laproducción primaria, se necesitan métodos rápidos para este tipo demuestras.

• Las industrias procesadoras de alimentos deberían implementarmétodos alternativos validados de cara a cumplir la legislación futuraen cuanto al control de Salmonella en producto final.

Agriculture R&D

MUCHAS GRACIAS