405
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LASERS. FUENTES. 543. 405. 633. 405. 488. UV. UNIDAD DE BARRIDO. No tocar!! (Se desalinean los lásers ). X. X. Llave Vertical (dos posiciones, una para cada set de lásers). Abajo : 405/488/543 Arriba : 633/488/543. Llave de Espejo Dicroico. Canal 2. Canal 1. >570. < 570. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
405543
633
488UV
405
LASERS FUENTES
UNIDAD DE BARRIDO
Abajo : 405/488/543Arriba : 633/488/543
Llave Vertical(dos posiciones, una para cada set de lásers)
X
X
No tocar!! (Se desalinean los lásers).
Laser Laser
Llave de filtros -adentro: se interpone el filtroafuera: no se filtra
Llave de filtros
Canal 2 Canal 1
560-600 >660
430 - 460>510
Llave de Espejo
Dicroico>570 < 570
Laser 488
Llavevertical
Objetivo
Plano del preparado
Laser 405 (UV)
Laser 633
Abajo
Arriba
Llave de Espejo DicroicoTres posiciones, para seleccionar con cuál canal se va a detectar la emisión:
- Adentro: Canal 1- Afuera: Canal 2- Intermedia: Ambos (< 570 va a Canal 1 y >570 va a Canal 2).
Llaves de filtrosPara filtrar la luz emitida según el espectro del fluoróforo.Dos posiciones: adentro: se interpone el filtro
afuera: no se filtraLos filtros instalados son:Canal 1: 430-460 (por ej DAPI) Canal 2 :560-600 (por ej. TRICT)
>510 (por ej. FICT) >660 (por ej. Cy5)
Llave VerticalDos posiciones, una para seleccionar con qué set de
lásers se va excitar la muestra:Abajo : 405 – 488 – 543Arriba : 633 – 488 – 543
En suma:
NOTAR QUE: Si está acostumbrado a chequear con el software la configuración, tenga en cuenta que para FICT y afines le va a seguir indicando los filtros 510 y 530, aunque ahora sólo usaremos el 510
Hay 10 combinaciones posibles
Las 7 combinaciones básicas y3 más
Las 7 básicas se pueden combinar en simultaneo con luz transmitida
Llavevertical
Filtro Rojo(560-600)
Opción 1:Quiero ver una marcación Con texas red o similar (rojo)
Láser 543 prendido
Llave vertical irrelevante
Shutter abierto (software)
Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera)
Filtro Rojo activo
objetivo
Plano del preparado
Canal 2
>570
Llave de Espejo Dicroico: Afuera
560-600
Laser 488
objetivo
Plano del preparado
Opción 2:Quiero ver una marcación Con FITC o similar (verde/amarillo)
Laser 488 prendido
Llave vertical irrelevante
Shutter abierto (software)
Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro)
Filtro Verde Activo
Canal 1
>510
< 570
Llave de Espejo Dicroico: Adentro
Opción 3:Quiero ver azul (i.e. DAPI)
Laser UV prendido
Llave vertical abajo
Shutter abierto (software)
Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro)
Filtros azulactivo
Laser uv
Llavevertical
objetivo
Plano del preparado
Canal 1
< 570
Llave de Espejo Dicroico: Adentro
430 - 460
Opción 4:Quiero ver Rojo lejano
Laser 633 prendido
Llave vertical para arriba
Shutters abierto (software)
Registro en canal 2 (Llave Espejo Dicroico Afuera)
Filtro rojo lejano activo
Plano del preparado
Laser 633
Llavevertical
objetivo
Filtro Rojo(> 660)
Canal 2
>570
633
Llave de Espejo Dicroico: Afuera
>660
Laser 633
Llavevertical
Opción 5:Quiero ver doble marcadoFITC y Rojo lejano
Laser 633 prendidoLaser 488 prendido
Llave vertical para arriba
Shutters abiertos (software)
Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia)
Filtros rojo lejano y verde activos
objetivo
Plano del preparado
Canal 2 Canal 1Llave de Espejo
Dicroico: Intermedia>570 < 570
>510
>660
560-600
>510
Laser 488
objetivo
Plano del preparado
Opción 6 (menos especifica que la anterior):Quiero ver doble marcadoCon texas red o similar (rojo)Y con FITC o similar (verde amarillo)
Laser 488 prendidoLaser 543 prendido
Llave vertical irrelevante
Shutters abiertos (software)
Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia)
Filtros Rojo y Verde activos
Canal 2 Canal 1Llave de Espejo
Dicroico: Intermedia>570 < 570
Laser UV
Llavevertical
Opción 7 :Quiero ver texas red y fluorescente azul (i.e. DAPI)Decir los problemas
Laser UV (405) prendidoLaser 543 prendidoLlave vertical para abajoShutters abiertos (software)
Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia)
Filtros azul y rojo activos
objetivo
Plano del preparado
Canal 2 Canal 1Llave de Espejo
Dicroico: Intermedia>570 < 570
560-600
430 - 460
Tres opciones mas
Dos de triple marcado
y una de cuádruple marcado
Opción 8 (para triple marcado):Quiero ver FITC, Rojo lejano y AZULLáser 633, 488 y UV (405) prendidos
Primera pasadaShutters 633 y 488 abiertos (software)Filtros rojo y verde activosLlave vertical para arribaRegistro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia)
Segunda pasadaLlave vertical para abajoShutters UV (405) abierto (software)Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro)Filtro Azul activo
Laser 633
Llavevertical
objetivo
Laser UV
Llavevertical
objetivo
Plano del preparado
>510
>660
430 - 460
Canal 2 Canal 1
>570 < 570
2 fluorocromos y luz transmitida
Opción 9 (poco probable porque TxR y Rojo lejano cerca):Quiero ver texas red, rojo lejano y azul (i.e. DAPI)Laser UV (405), 543 y 633 prendidosPrimera pasadaLlave vertical para abajoShutters UV, 543 abiertos (software)Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia) Filtros azul y rojo activos
Segunda pasada Llave vertical para arribaShutter 633 abiertoRegistro en canal 2:(Llave Espejo Dicroico Afuera)Filtro rojo activo
Laser UV
Llavevertical
objetivo
Laser 633
Llavevertical
objetivo
Plano del preparado
560-600
430 - 460
>660
Canal 2 Canal 1>570 < 570
Laser 633
objetivo
Llavevertical
Opción 10: Ud es exigente y quiere ver todoTodos los Lasers prendidosPrimera pasada Shutters 546 y UV abiertosLlave vertical para abajoRegistro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)Filtros Rojo y UV activos
Segunda pasada Shutters 633 y 488 abiertosLlave vertical para arribaRegistro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)Filtros rojo lejano y verde activos o si Ud prefiere al revés puede ser también
Laser UV
Llavevertical
objetivo
Plano del preparado
Canal 2 Canal 1>570 < 570
Sequential scan con canales virtuales3 o 4 fluorocromos y luz transmitida
NOTAR que el programa no acepta ingresar más de dos fluorocromos, el tercero se
especifíca después (cuando se agrega el canal virtual)
6
Si tiene cualquier duda o piensa que necesita algún cambio de configuración CONSULTE a la COMISIÓN.No haga cambios sin avisar al resto!! Así evitaremos pérdida de tiempo y hasta de preparados de todos.
Por cualquier consulta a la hora de usar el microscopio me peden encontrar de lunes a jueves de 13 a 17hs y los viernes de 9 a 13 hs en el interno 123 del IIBCE. Mi mail es [email protected]
Marcela Díaz
Investigadora contratada Grado 1 del servicio de microscopia confocal
IIBCE