2014. xvii congreso estudiantil de farmacología en honor al dr. horacio vidrio lópez. actividad...

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Actividad antivíral del árbol Vismia mexicana c o n t r a l a T r a n s c r i p t a s a Reversa d e l V i r u s d e Inmunodefíciencia H u m a n a t i p o 1 Hernández Pasteur Griselda, Gómez Cansino Rodó, Guzmán Gutiérrez Silvia L a u r a , M a g o s G u e r r e r o G i l A l f o n s o * * , Reyes Chilpa Ricardo*. • I n s t i t u t o d e Química, *' F a c u l U d d e M e d i c i n a , UNAM. g r i s n a v . 8 9 1 3 ^ e m a i l . c o m : c h i l p a i P u n a m . m x Introducción Actualmente más d e 40 millones de personas a nivel mundial están infectadas con VIH y han ocurrido 24 millones de fallecimientos e n e l mundo^ S e h a n d e s a r r o l l a d o fármacos, que n o e l i m i n a n p o r completo la infección, pero mejoran la calidad de vida de l o s e n f e r m o s ; n o obstante, m e n o s d e l 7% de ta población i n f e c t a d a c o n el v i r u s t i e n e acceso a estos tratamientos debido a s u s a l t o s c o s t o s y la b a j a d i s p o n i b i l i d a d por lo que e s n e c e s a r i o c o n t i n u a r c o n l a búsqueda d e c o m p u e s t o s activos-. A la fecha se han logrado identificar poco mas de 120 compuestos naturales, principalmente de p l a n t a s , q u e pueden impedir l a replicación del virus. Previamente s e h a reportado que un extracto de l a s h o j a s de Vismia mexicana (Hypericeae) i n h i b e n l a e n z i m a t r a n s c r i p t a s a r e v e r s a del VIH^. En e s t e t r a b a j o continuamos con t a identificación d e fracciones y compuestos activos. Materiales y Métodos Extracto MetanoUco de Vismia mexicana Imagen 1. Ciclo Replicatívo del VIH. CIC»4t<UiM«tni Cromatograña en Columna Resultados Imagen 2. Cromatografía en Capa F i n a , F a s e N o r m a l y F a s e R e v e r s a del Extracto, Fracciones y Subfracciones. Cromatografía en Capa Fina (ClFe,) Reunión de fracciones ^liiliáiii F N . F M : AcOEt/MeOH 8:2 FR. FM: MeOH/ HlO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 lOJlliU 13 14 15 16 17 ; i ,! ; I I i i— _J i 1 L , Cromatografía en Capa Fina Preparativa TaMa 2. Inhibición d e l a R T - V I H -1 d e l a s F r a c c i o n e s mas activas. Muestra % de Inhibición (50 (ig/mL) IC,-jig/mL Prueba in vitro RT-VIH -1 Molde BrdUTP InIcladop- Ab-AP >-C «• pNPP Subfracción XSm Fracción X I Fracción XIII Fracción XV 84.17 60.80 64.58 71.27 75.92 78.01 9.62 9.77 15.55 14.2 3.66 pNP Conclusión Las fracciones más polares de Vismia mexicana mostraron una potente actividad inhibitoria de la RT, como lo muestran los valores de IC^Q; sin embargo es necesario seguir trabajando para identificar y purificar los compuestos activos presentes. Estos compuestos podrían s e r polifenoles considerando que revelaron con Ooruro Férrico y se observaron en Cromatografía en Capa Fina de Fase Reversa. Agrad*clmiantot A la PAPllT-DGAM-UNAM p o r e l f i n a n d a m i e n t o d e l p r o y e c t o I G 20OS13 y a CONACYT por e ( a p o y o económico a Grtsehja Hernández Pasteur como Ayudante de Investigador SNI III. Sibllocnifla 1- Reyes Chitpa y M . H u e r t a - R e y e s M . 2009. C o m p u e s t o s N a t u r a l e s d e Plantas d e l a F a m i l i a C l u s i a c e a e . I n h i b i d o r e s d e l V i r u s d e I n m u n o d e f k t e n c i a H u m a n a T i p o 1 . Intertíencia (Wneiueh) 34(61:385-392- 2- Esparza, i. 200S. The global VIH vaccíne enterprise Int. Microb. 8:93-101 3 - H u e r t a - R e y e s M . , B a s u a l d o M . C„ t o z a d a L , Jiménez Estrada M., Soler C. y R e y e s - C h u p a R . 2004a. H I V - 1 l o h I W t i o n b y E x t r a c t s o f O u s l a c e a e Species from México. BM. Pharm. Bult. 27(6) 916-920. - Shao, X . , E k s t r a n d D H L , B h i V h a b h a i R . . K a l l a n d e r C F R , Gronowitz JS. 1997, A Non-RadioactiveMicrotrtre Píate R e v e r s e T r a r ( S c r l p t a s e ( B T ) Assay, flased o n t m m o b t i i z e d T e m p l e t e , f o r Screeningor RT Aviivity I n h i b r t o r s a n d E v a l u a t i o n o f theír M o d e o t A c t i o n . Antiviral Chemistry & Therapy 8(2): 149-159.

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Page 1: 2014. xvii congreso estudiantil de farmacología  en honor al dr. horacio vidrio lópez. actividad antiviral del árbol vismia mexicana

A c t i v i d a d antivíral d e l árbol Vismia mexicana c o n t r a l a T r a n s c r i p t a s a R e v e r s a d e l V i r u s d e Inmunodefíciencia H u m a n a t i p o 1

Hernández P a s t e u r G r i s e l d a , Gómez C a n s i n o Rodó, Guzmán Gutiérrez S i l v i a L a u r a , M a g o s G u e r r e r o Gi l A l f o n s o * * , R e y e s C h i l p a R i c a r d o * . • I n s t i t u t o d e Química, *' F a c u l U d d e M e d i c i n a , U N A M . g r i s n a v . 8 9 1 3 ^ e m a i l . c o m : c h i l p a i P u n a m . m x

Introducción

A c t u a l m e n t e más d e 4 0 m i l l o n e s d e p e r s o n a s a n i v e l m u n d i a l están i n f e c t a d a s c o n V I H y h a n o c u r r i d o 24 m i l l o n e s d e f a l l e c i m i e n t o s e n e l m u n d o ^ S e h a n d e s a r r o l l a d o fármacos, q u e n o e l i m i n a n p o r c o m p l e t o l a infección, p e r o m e j o r a n l a c a l i d a d d e v i d a d e l o s e n f e r m o s ; n o o b s t a n t e , m e n o s d e l 7 % d e t a población i n f e c t a d a c o n e l v i r u s t i e n e a c c e s o a e s t o s t r a t a m i e n t o s d e b i d o a s u s a l t o s c o s t o s y l a b a j a d i s p o n i b i l i d a d p o r l o q u e e s n e c e s a r i o c o n t i n u a r c o n l a búsqueda d e c o m p u e s t o s a c t i v o s - .

A l a f e c h a s e h a n l o g r a d o i d e n t i f i c a r p o c o m a s d e 1 2 0 c o m p u e s t o s n a t u r a l e s , p r i n c i p a l m e n t e d e p l a n t a s , q u e p u e d e n i m p e d i r l a replicación d e l v i r u s . P r e v i a m e n t e s e h a r e p o r t a d o q u e u n e x t r a c t o d e l a s h o j a s d e Vismia mexicana ( H y p e r i c e a e ) i n h i b e n l a e n z i m a t r a n s c r i p t a s a r e v e r s a d e l V I H ^ . E n e s t e t r a b a j o c o n t i n u a m o s c o n t a identificación d e f r a c c i o n e s y c o m p u e s t o s a c t i v o s .

M a t e r i a l e s y Métodos

E x t r a c t o M e t a n o U c o d e Vismia mexicana

I m a g e n 1 . C i c l o Replicatívo d e l V I H .

CIC»4t<UiM«tni

Cromatograña e n C o l u m n a

R e s u l t a d o s

I m a g e n 2 . Cromatografía e n C a p a F i n a , F a s e N o r m a l y F a s e R e v e r s a d e l E x t r a c t o , F r a c c i o n e s y S u b f r a c c i o n e s .

Cromatografía e n C a p a F i n a ( C l F e , )

Reunión d e f r a c c i o n e s

^ l i i l i á i i i F N . F M : A c O E t / M e O H 8:2 F R . F M : M e O H / H l O

1 2 3 4 5 6 7 8 9 l O J l l i U 13 14 15 16 17 ; i , ! ; I I i i — _ J i 1 L ,

Cromatografía e n C a p a F i n a P r e p a r a t i v a

T a M a 2 . Inhibición d e l a R T - V I H - 1 d e l a s F r a c c i o n e s m a s a c t i v a s .

M u e s t r a % d e Inhibición ( 5 0 ( i g / m L ) • I C , - j i g / m L

P r u e b a in vitro R T - V I H - 1

M o l d e

B r d U T P

I n I c l a d o p - Ab-AP >-C

«• p N P P

Subfracción X S m

Fracción X I Fracción X I I I Fracción X V

84 .17 60 .80 6 4 . 5 8 71.27 75.92 7 8 . 0 1

9 .62 9.77

15.55 14.2 3 .66

p N P Conclusión L a s f r a c c i o n e s más p o l a r e s d e Vismia mexicana m o s t r a r o n u n a p o t e n t e a c t i v i d a d i n h i b i t o r i a d e l a R T , c o m o l o m u e s t r a n l o s v a l o r e s d e I C ^ Q ; s i n e m b a r g o e s n e c e s a r i o s e g u i r t r a b a j a n d o p a r a i d e n t i f i c a r y p u r i f i c a r l o s c o m p u e s t o s a c t i v o s p r e s e n t e s . E s t o s c o m p u e s t o s podrían s e r p o l i f e n o l e s c o n s i d e r a n d o q u e r e v e l a r o n c o n O o r u r o Férrico y s e o b s e r v a r o n e n Cromatografía e n C a p a F i n a d e F a s e R e v e r s a .

A g r a d * c l m i a n t o t A la P A P l l T - D G A M - U N A M p o r e l f i n a n d a m i e n t o d e l p r o y e c t o IG 20OS13 y a C O N A C Y T p o r e( a p o y o económico a G r t s e h j a Hernández P a s t e u r c o m o A y u d a n t e d e I n v e s t i g a d o r S N I III.

S i b l l o c n i f l a 1 - R e y e s C h i t p a y M . H u e r t a - R e y e s M . 2009. C o m p u e s t o s N a t u r a l e s d e P l a n t a s d e l a F a m i l i a C l u s i a c e a e . I n h i b i d o r e s d e l V i r u s d e I n m u n o d e f k t e n c i a H u m a n a T i p o 1 . Intertíencia ( W n e i u e h )

34(61:385-392-2- E s p a r z a , i . 200S . T h e g l o b a l V I H vaccíne e n t e r p r i s e Int. M i c r o b . 8 : 9 3 - 1 0 1 3 - H u e r t a - R e y e s M . , B a s u a l d o M . C„ t o z a d a L , Jiménez E s t r a d a M . , S o l e r C . y R e y e s - C h u p a R . 2004a. H I V - 1 l o h I W t i o n b y E x t r a c t s o f O u s l a c e a e S p e c i e s f r o m México. BM. Pharm. Bult. 27(6)

916-920. - S h a o , X . , E k s t r a n d D H L , B h i V h a b h a i R. . K a l l a n d e r C F R , G r o n o w i t z J S . 1997, A N o n - R a d i o a c t i v e M i c r o t r t r e Píate R e v e r s e T r a r ( S c r l p t a s e ( B T ) A s s a y , flased o n t m m o b t i i z e d T e m p l e t e , f o r

S c r e e n i n g o r R T A v i i v i t y I n h i b r t o r s a n d E v a l u a t i o n o f theír M o d e o t A c t i o n . Antiviral Chemistry & Therapy 8(2): 149-159.