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Procedimiento de la huella genética de ADN
Huella Genética de ADN
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Tubos para cada grupo de trabajo
Huella Genética de ADN
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Sospechoso 1 – 5Tubos que contienen 10 µl de muestra de ADN
70 µl Mezcla de enzimas
0,24 g de Agarosa
10 µl Marcador
80 µl solución tampón
10 µl CS ADN
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1. Preparación de la restricción
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¡Atención!
• Para cada pipeteo usa una punta de pipeta nueva para evitar contaminaciones.
• Por favor, recorta todos los tubos al menos durante 30 segundos para mezclarlos.
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1. Tubos con muestras de ADN
ADN 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl
CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5
10µl
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1.1 Pipetea 10 µl de la mezcla de enzimas en cada tubo
ADN 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl
CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5
10µl
Mezcla 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl enzimas (ENZ)
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2. Digestión de restricción
Coloca los tubos en un bastidor flotante e incubarlos durante 30 min a 37 ºC en un baño de agua o en una estufa.
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3. Preparar la electroforesis
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Insertar la cestilla, las varillas de metal y el peine en la camara de electroforesis.
3.1 Preparar la cámara de electroforesis
Varillas metálicas Cestilla
Peine
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3.2 Fabricar el gel de Agarosa (0,8%)
• Introducir 0,24 g de agarosa + 30 mL TAE-tampón en un frasco Erlenmeyer de 250 mL.
• Calentar un poco el frasco Erlenmeyer en el microondas, removerlo y calentarlo otro poco.
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3.3 Verter el gel
Vierte el gel a 55 °C en la caja del gelAtención:
•Comprueba la temperatura con el dorso de la mano
•No mover el gel hasta que esté sólido.
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3.4 Preparar la cámara
• Después de que el gel se haya solidificado, quita las varillas de metal de la cámara de electroforesis
• Llena la cámara con270 ml de TAE-tampón para cubrir el gel.
• Tira el peine.Huella Genética de ADN
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4. Preparación del marcador de ADN
Pipetea 10 µl de la solución tampón (Loading Buffer) en 10 µl marcador de ADN (M).
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5. Añadir 10 µl de solución tampón (Loading
Buffer)
Pipetea 10 µl de la solución tampón en el CS y S1- S5.
10 µl10 µl
10 µl
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Pipetea 20 µl de cada muestra y 20 µl de marcador de ADN(M) en los pocillos
6. Llenar los pocillos
¡Recuerda la secuencia!
Líneas: llena de izquierda a derecha
La línea izquierda permanece libre
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6. Llenar los pocillos
Atención: las bolsas de gel no deben estar perforadas
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7. Electroforesis (a 120 V ca. 30 min)
Para la electroforesis cuando la banda azul haya migrado a 1 cm antes del final del gel.
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8. Colorear el ADN
• Transfiere el gel en el bol del colorante y cúbrelo con 60 mL de la solución de la tinción durante 2 min.
• Coloca la solución de tinción en el frasco Erlenmeyer.
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9. Analizar el gel
CS S1 S2 S3 S4 S5 M
¿Cúal de los sospechosos es el culpable?
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9. Resultado
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