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Práctica 1
Determinación de fosfato en bebidas de
cola por espectrofotometría uv-
vis Presentado por:Cabañas Borges KarenCiau Mendoza José Antonio Ruiz Salazar MónicaTun Vázquez Patricia
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Conocer las partes y el manejo de un
espectrofotómetro de UV-VIS.
Realizar una curva de calibración para cuantificar, por UV-VIS, el contenido de fósforo en una muestra de refresco de cola.
Objetivos:
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Técnica analítica que permite
determinar la concentración de un compuesto en solución.
Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas.
Espectrofotometría UV-Vis
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Una molécula cromofora es aquella que
absorbe parte de la radiación incidente que incide sobre ella.
Absorbancia: Indica la cantidad de luz absorbida por la molécula y se define como:
Conceptos básicos.
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Instrumentación
www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf (Consultado el 14 de Julio 2014)
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Análisis cualitativo: es poco utilizado, debido a la existencia o no de cromóforos en la molécula
Análisis cuantitativo: se debe tener en cuenta que la ley de Lambert-Beer no se cumple para concentraciones superiores a 0.02 M.
Aplicaciones:
García Bermejo Ma. José; Colom Valiente María Francisca. (2003). Manual Auxiliar de Laboratorio. 2ª edición. Ed. MAD. S.L. pp: 381
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Se pueden realizar:
Análisis de sustancias que absorben por si mismas.
Análisis de sustancias no absorbentes, las cuales se hacen reacción con un determinado reactivo, con el fin de producir una especie absorbente, con una concentración proporcional a la sustancia a medir.
Análisis de mezclas.
García Bermejo Ma. José; Colom Valiente María Francisca. (2003). Manual Auxiliar de Laboratorio. 2ª edición. Ed. MAD. S.L. pp: 381
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Relaciona las absorbancias con las concentraciones. Se realiza con soluciones de distinta concentración y a cada una de ellas se le establece su absorbancia a determinada longitud de onda.
Curva de calibración
García Bermejo Ma. José; Colom Valiente María Francisca. (2003). Manual Auxiliar de Laboratorio. 2ª edición. Ed. MAD. S.L. pp: 381
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Se requiere que la sustancia a determinar sea la
única especie absorbente a la longitud de onda seleccionada.
La muestra y patrones deben ser preparados de la misma forma antes de la medición de la absorbancia.
Es indispensable la preparación de un blanco .
La absorbancia del blanco se resta de todas las absorbancias a la longitud de onda elegida antes de hacer cualquier cálculo.
Sara Aldabe. (2004). Química 2. 1ª edición. Ed. Colihue pp: 323
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Preparar 100 mL de una solución stock de 100 ppm de P2O5 a partir de fosfato
monobásico de potasio o de fosfato dibásico de potasio
De la solución anterior, reparar 25 mL de una solución de 4 ppm.
Pesar 0.156 g de molibdato de amonio y disolver en 5 mL de agua
destilada.
Preparación de disoluciones.
𝛼1
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Medir 2.2 mL de H2SO4 concentrado y diluir en
15 mL de agua.
Pesar 0.2112 g de ácido ascórbico y disolver en 10 mL de
agua destilada.
Mezclar las tres soluciones anteriores y
aforar a 50 mL con agua destilada.
𝛼1
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De la solución de trabajo, extraer
alícuotas de 1, 2, 3, 4 y 5 mL.
Agregar 4 mL de la solución reductora y aforar a 10 mL.
Incubar durante 30 minutos a 50º C (baño María).
Preparación de la curva de calibración.
A partir de la longitud de onda en la que se alcanza el máximo de absorción realizar el análisis
de la curva de calibración y las muestras.
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Análisis espectrofotométrico.
Desgasificar aproximadamente 10 mL de la muestra.
Tomar 1 mL de refresco desgasificado y aforar a 50 mL.
Tomar una alícuota de 1 mL de la solución anterior depositar en un matraz aforado de 10 mL,
Añadir 4 mL de solución reductora y aforar con agua destilada
𝛼2
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Trabajar un duplicado.
Incubar durante 30 minutos a 50º C (baño María).
Trabajar con un blanco de reactivos
Realizar un barrido de exploración con el punto de la curva de
calibración más concentrado, de 700 a 850 nm.
𝛼2
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Preparación de 100 mL de solución stock de
100 ppm de a partir de fosfato monobásico. Ppm= mg de soluto=(110ppm)(0.1Kg)= 10 mg de
soluto 10mg x
Cálculos previos.
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Preparación de 25 mL de solución de trabajo
de 4 ppm a partir de una solución de 100 ppm.
C1V1=C2V2C1=100 ppm V1=? V2=25 mL C2=4 ppm
Cálculos previos.